リキッドバイオプシーによる測定・解析サービス

リキッドバイオプシー（液体生検）は、血液など低侵襲性の液体生体試料を用いて診断や治療薬の選択等に役立つ技術であり、内視鏡や針を用いた患者負担の大きい生検に代わり、繰り返し行うことができる検査方法として近年注目されています。
当社は、リキッドバイオプシーの主要な評価対象として注目されるエクソソーム（細胞外小胞（Extracellular Vesicles : EVs））、循環腫瘍細胞（Circulating Tumor Cell: CTC）、セルフリーDNA（cfDNA）の測定解析サービスを包括的に提供し、リキッドバイオプシーに関わる研究開発を分析面から幅広くサポートします。

主な受託メニュー※

エクソソーム細胞外小胞(Extracellular Vesicles: EVs)	エクソソームの濃縮・精製、品質管理から、内包されるmicroRNA、たんぱく質などのバイオマーカーの測定まで、包括的な測定解析サービスを提供します。
循環腫瘍細胞 Circulating Tumor Cells: CTC	マイクロ流路チップ型セルソーターを用いて、最大血液量8ｍLよりCTCを分離し、表面マーカー・標的分子の発現解析や変異遺伝子検出など多様な項目をバイオマーカー情報として提供します。
セルフリーDNA Cell Free DNA：cfDNAまたはCirculating Tumor DNA: ctDNA	血液もしくは血漿からセルフリーDNAを抽出し、PCRや次世代シーケンサー（NGS）を用いて変異遺伝子を検出します

※
本サービスは研究を対象としており、診断目的でのサービス提供ではありません。

ヒト臨床サンプルにおける留意事項

お客様が所属される研究機関や病院等における倫理審査委員会において、科学的および倫理的妥当性に関する承認を得た上でご依頼ください。
インフォームドコンセントを受けたものであること、個人情報が特定できないよう氏名等削除措置が実施されていることをご確認の上、ご提供ください。
BSL３以上の感染性物質を含む検体およびヒト免疫不全ウィルス（HIV）陽性検体は受け入れできません。※

※
COVID-19はウィルスとしてはBSL３ですが、検体はBSL２として取り扱いを可能とする国立感染症研究所の方針に則って、特別な措置の上、受け入れ可としています。

試験詳細情報

セルフリーDNA（cfDNA）
概要
cfDNAは、血液中に遊離して存在している170塩基対前後のDNA断片です。特にがんの分野では生検に代わりcfDNAを用いることで、がんドライバー変異の探索、がんの進行や再発、薬効予測や治療効果などのバイオマーカーとして研究・実用化が進められています。一方で、正常細胞に由来する大部分のcfDNAからがん細胞由来のcfDNAを識別するために、高感度な分析法が求められています。当社ではqPCR(quantitative Polymerase Chain Reaction)や分子バーコードを使用したNGS(Next Generation Sequencing)のパネル解析により、高感度検出が可能です。
受託項目	概要
cfDNAの変異遺伝子解析	血液もしくは血漿からcfDNAを抽出し、qPCR、もしくは分子バーコードを使用したNGSのパネル解析により変異遺伝子解析を行います。

cfDNA -その特徴-

がん細胞からアポトーシス／ネクローシスによる生じるセルフリーDNAや、ExosomeおよびCTC（血中循環腫瘍細胞）の模式図

170塩基対前後のDNA断片
半減期は1時間以下
主にアポトーシスによる細胞死で血液中に放出
がんや胎児異常の診断に既に実用化
正常細胞に由来する大部分のセルフリーDNAから、～0.4%と言われているがん細胞由来のセルフリーDNAを識別するには高感度な分析法が必要

デジタルPCR(droplet digital Polymerase Chain Reaction: ddPCR)とNGSでの変異遺伝子確認比較

変異率～2%、～1%、～0.5%、～0.1%となるように、健常人血漿DNAにMultiplex I cfDNA reference standardを添加し、デジタルPCRとNGSで検出された変異率を比較

変異率～2%、～1%、～0.5%、～0.1%となるように、健常人血漿DNAにMultiplex I cfDNA reference standardを添加した説明図

EGFRとKRASについて、デジタルPCRとNGSで検出された変異率の相関グラフ

濃度依存的に変異を検出することができ、デジタルPCRとNGSの結果には相関が認められました。

肺がん患者のNGS変異遺伝子検出例

肺がん患者の血漿4 mLよりcfDNAを抽出し、Oncomine Lung cfDNA assay (Thermo Fisher Scientific)を用いてNGSより変異遺伝子を解析

Sample	Stage	Gene	Allele Name	Molecular coverage	Frequency
Healthy	—	—	—	—	—
Lung Cancer1	IVB	KRAS	p.G12D ※	1757	8.594
Lung Cancer2	IV	TP53	p.R248Q ※	2413	0.083
		TP53	p.R248G	2413	0.332
		TP53	p.H179R ※	1902	0.105
Lung Cancer3	IIIB	TP53	p.V272=;R273C	4880	29.898
Lung Cancer3	IIIB	TP53	p.V157I	2864	0.07